品牌 | takara寶日醫 |
貨號 | 6136 |
用途 | cDNA文庫構建 |
包裝規格 | 5 Rxns |
Takara cDNA文庫構建試劑盒 cDNA Library Construction Kit
6136
Takara
作為Takara授權代理商,華雅思創生物致力于為科研人員提供高品質的Takara cDNA文庫構建試劑盒 cDNA Library Construction Kit。我們不僅提供 的產品,更提供全面的技術支持和服務,確保您的科研工作順利進行。
Takara cDNA文庫構建試劑盒 cDNA Library Construction Kit
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Takara
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Takara cDNA Library Construction Kit 是專為合成生物學研究設計的高效文庫構建試劑盒。試劑盒包含了從RNA到雙鏈cDNA合成的所有試劑,包括PrimeScript™反轉錄酶、隨機引物、dNTPs和優化的反應緩沖液。通過利用SMART™技術,該試劑盒能高效合成高質量的cDNA,適用于后續的文庫構建和高通量測序。
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利用真核生物的各種組織或細胞中的Poly(A)+RNA合成cDNA,然后進行基因克隆,這在分子生物學實驗中被廣泛應用。這一技術的使用,使基因的結構解析及目的蛋白的表達等變得更為方便。
一般合成cDNA以及構建cDNA Library的方法為: ① 合成與目的Poly(A)+RNA相互補的雙鏈cDNA;② 將雙鏈cDNA與細菌或病毒來源的載體進行重組; ③ 將重組體導入細菌或真核細胞內進行擴增,構建cDNA Library。構建成的cDNA Library可以用于cDNA的解析,或者進一步進行體外轉錄或體外翻譯等。
本試劑盒原理采用了Gubler-Hoffman法 (Linker Primer法),是一種可以控制克隆基因方向性的Directional Cloning法,其原理見下圖,具體說明如下:
1. 利用反轉錄酶PrimeScript RTase和Oligo(dT)18 Anchor Primer1,3-5)合成1st Strand cDNA。1st Strand cDNA合成時使用5-methyl dCTP。
2. E.coli RNase H使mRNA-1st Strand cDNA雜合體中的RNA形成Nick,再使用E.coli DNA Ploymerase和E.coli DNA Ligase將RNA鏈置換成DNA鏈,合成2nd Strand cDNA。
3. 使用T4 DNA Polymerase將雙鏈cDNA末端平滑化。
4. 與Adaptor連接后,使用Not I 進行酶切。
5. 使用Spin Column除去短鏈cDNA。
6. 與Vector pAP3neo進行連接 (Directional Cloning)。
7. 利用電刺激轉化法導入大腸桿菌。
8. 確認克隆效率及插入片段大小等。