E8725F HY STEMCELL自主研發 MSC細胞培養基 現貨

產品組份：

DMEM/F12 base        Essential GFs

Glutamine             Transferrin

NaHCO3               Albumin

Selenium              Insulin

完全培養基的配制：

將完全溶解的CCGmHuM®Human MSCs Supplement Medium（10x）細胞因子添加物加入到相應體積的基礎培養基中，充分混合均勻，制備成完全培養基。培養基和CCGmHuM®Human MSCs Supplement Medium（10x）細胞因子添加物的混合比例為9:1，即每9mL基礎培養基需要添加1mL細胞因子添加物。

為維持添加物中細胞生長因子的活性，請將配制好的完全培養基置于4℃避光保存，儲存時間不宜超過4周，1周內用完 。

人骨髓間充質干細胞培養：

1.將骨髓樣品制備成單細胞懸液，推薦使用密度梯度離心法獲得單個核細胞進行以下實驗。

2.PBS清洗細胞兩次。

3.棄上清，用完全培養基重懸細胞。

4.細胞計數，調整細胞濃度為5～7.5×106/mL。

5.根據擬采用培養瓶或培養皿的底面積，計算接種細胞總量。

6.將接種好的細胞置于5% CO2，濕度大于95%的37℃培養箱培養。根據細胞生長狀況換液。

脂肪間充質干細胞的分離：

1. 人脂肪組織來自脂肪抽吸患者的廢棄脂肪組織。

2. 無菌PBS反復漂洗除菌。

3. 將脂肪組織轉移至50mL或250mL離心管，加入等體積的使用alpha-MEM配制的膠原酶溶液，使其終濃度達到0.1%（重量/體積）。

4. 37℃，搖床（120rpm）消化2小時以上。

5. 室溫靜置10分鐘，吸除上層油滴。

6. 離心，800g，10分鐘，收集消化細胞。

7. PBS洗滌一次，500g，10分鐘。MSCs無血清完全培養基懸浮細胞。

8. 計細胞數，調整細胞濃度，按照5～10×105/cm2底面積接種。

9. 次日觀察，如無污染，繼續培養至培養基顏色變黃，或貼壁細胞密度達到30%以上。補充新鮮的MSC無血清完全培養基。

10. 細胞密度達到80%左右時，按照以下步驟傳代培養。

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