產品組份：本產品包括以下8種明確公開組份：

DMEM/F12 base        Essential GFs

Glutamine             Transferrin

NaHCO3               Albumin

Selenium              Insulin

脂肪間充質干細胞的分離：

1. 人脂肪組織來自脂肪抽吸患者的廢棄脂肪組織。

2. 無菌PBS反復漂洗除菌。

3. 將脂肪組織轉移至50mL或250mL離心管，加入等體積的使用alpha-MEM配制的膠原酶溶液，使其終濃度達到0.1%（重量/體積）。

4. 37℃，搖床（120rpm）消化2小時以上。

5. 室溫靜置10分鐘，吸除上層油滴。

6. 離心，800g，10分鐘，收集消化細胞。

7. PBS洗滌一次，500g，10分鐘。MSCs無血清完全培養基懸浮細胞。

8. 計細胞數，調整細胞濃度，按照5～10×10⁵/cm²底面積接種。

9. 次日觀察，如無污染，繼續培養至培養基顏色變黃，或貼壁細胞密度達到30%以上。補充新鮮的MSC無血清完全培養基。

10. 細胞密度達到80%左右時，按照以下步驟傳代培養。

間充質干細胞的傳代：

1. 吸去培養液。

2. 用1×PBS洗滌細胞2次，以去除殘留的培養液。

3. 加入PBS，之后加入0.25％Trypsin-0.1%EDTA，PBS與胰蛋白酶體積比為4:1，兩者總量以覆蓋培養皿或培養瓶表面為宜。輕輕旋轉，置37℃培養箱中消化3～5分鐘。用手輕拍培養器皿的壁，顯微鏡下可見絕大部分細胞變圓，極少量細胞貼壁仍呈紡錘形，極少量細胞已經懸浮即可終止消化。依據不同批次胰蛋白酶活性不同，消化的時間以顯微鏡下觀察細胞變圓為準，但是，推薦消化時間不低于3分鐘。

4. 立即加入等體積的間充質干細胞完全培養液，用吸管吸取液體，反復吹打培養器皿底壁，使細胞 脫離瓶皿底壁。

5. 離心（250g，5分鐘），吸去上清液。

6. 用2～3mL間充質干細胞的完全培養液重懸細胞。

7. 按照6000個細胞/cm²的密度來接種細胞。

8. 加足夠的間充質干細胞的完全培養液，在37℃，5％ CO₂和 相對濕度的培養箱中培養。

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