在生物醫學研究中,細胞培養是一項基礎而關鍵的技術。為了確保培養環境的純凈和穩定,科學家們常常需要使用抗生素來預防和控制微生物污染。G418,作為一種常用的篩選抗生素,因其獨特的作用機制和廣泛的應用范圍,在細胞培養領域中扮演著重要角色。
G418,也稱為Geneticin或遺傳霉素,屬于氨基糖苷類抗生素。它通過與核糖體不可逆地結合,破壞其校對能力,導致翻譯過程提前終止或發生錯譯,從而抑制蛋白質合成,阻止敏感細胞的生長。
G418的結構中含有雙堿基環醇和2-脫氧鏈霉胺,這些結構通過糖苷鍵與氨基糖連接。G418的獨特性來源于其C-6位置的羥基功能,而非氨基功能。這種結構上的差異使得G418能夠與80S核糖體復合物特異性結合,相較于其他氨基糖苷類藥物,G418對真核細胞蛋白質合成的抑制作用更為顯著。
G418常被用于篩選表達氨基糖苷類修飾酶的細胞株。這些修飾酶,如氨基糖苷磷酸轉移酶(APH),能夠共價修飾G418的氨基或羥基功能,削弱藥物與核糖體的相互作用,從而產生耐藥效果。當真核細胞成功轉染新霉素抗性基因后,它們能夠高效表達氨基糖苷磷酸轉移酶,獲得在含有G418的選擇性培養基中生長的能力。
G418作為真核翻譯抑制劑的推薦篩選濃度范圍為100-800 μg/mL。然而,有效的殺傷濃度會因細胞類型、培養基、生長條件等多種因素而異。因此,為了確保篩選的成功,建議通過實驗確定每個特定培養系統的工作濃度。
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G418有液體和粉末兩種形式,液體形式的濃度為50 mg/mL,粉末形式的純度大于700 μg/mg。儲存條件也有明確要求:液體需在2℃~8℃下保存,粉末則在15℃~30℃下避光存放。康寧提供多種規格的G418產品,以滿足不同規模研究的需求。