應用Western Blotting的方法檢測血清中某種蛋白的含量是,最關鍵的問題是要將血清做怎樣的電泳前處理.

一般的處理方式:

1.     常規分離血清,即取血后常溫放置,使其凝固,然后3000 rpm 15 min離心,取上清即可。

2.     測血清蛋白濃度。

3.     用Laemmli buffer（蛋白裂解液）稀釋至所需濃度，我一般為5ug/ul.

4.     加入適量loading buffer，100℃煮5分鐘。注意：有時會出現水煮后，蛋白液變得非常粘稠，這時可以在65℃煮10-20 minutes以替代沸水煮。

PS：對于目標蛋白在血清中含量很低，或者目標蛋白分子量與白蛋白或球蛋白分子量相近的情況下，必煩要去除血清中的白蛋白和/或球蛋白，以下是知名廠商G-Biosciences提供的試劑盒，使用較為簡便，同時價格也不貴哦。

美國G-Biosciences-AlbuminOUT?白蛋白去除試劑盒

血漿和腦脊髓液等樣本中，包含大量的白蛋白，從而封閉掉在二維凝膠電泳中發現和鑒定其他低豐度蛋白的可能。AlbuminOUT?白蛋白去除試劑盒被設計用來在這種樣本中大量去除白蛋白。

這種白蛋白去除方法是基于白蛋白和Cibachron藍色染料的結合。AlbuminOUT?被優化從樣本中去除人的白蛋白。AlbuminOUT?使用快速離心柱方法，每個柱子含有0.2ml的染料結合樹脂，從而可以結合大于2mg的人白蛋白。AlbuminOUT?可以從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白。

離心柱形式可以在10分鐘內去除白蛋白。高結合力的藍色染料結合樹脂可以從人，豬，羊，狗，兔，大鼠和牛樣本中達到瞬間的結合和去除白蛋白。AlbuminOUT?或許也可以從其他物種中去除白蛋白。適用于處理25或50個樣本。

Figure 1:  2D  analysis  of  whole  human  serum  before  (left)  and  after

(right) treatment with AlbminOUT^?.

產品特點：

l 從樣本中不到10分鐘的時間內去除白蛋白

l 基于白蛋白和Cibachron藍色染料的結合

l 每個柱子的結合力大于2mg的人白蛋白

l 從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白

應用：

從生物學樣本比如血漿和腦脊髓液中去除白蛋白

產品信息：